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使用马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml配制培养基,马铃薯去皮后切块洗净,加水1000毫升,文火煮沸30分钟后过滤取汁,将琼脂放入液体内文火煮沸,持续搅拌至溶解,培养基煮好后趁热分装试管,塞上棉塞,包扎塑料薄膜,放入灭菌锅,之后拿出斜放,散热后即凝固成斜面培养基。
缺点:由于培养基质疏松、菌丝生长阶段营养大量消耗,子实体成熟时间较短,无法产生活性物质丰富、营养成分充裕的子实体,子实体干燥后质地疏松,药效成分低。灵芝的基原植物为多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst.或紫芝G.sinenseZhao,XuetZhang,以干燥子实体入药。
一、准备用品与试剂
主要包括各类营养物质、高压灭菌锅、天平、棉塞、试管(20毫米×200毫米)、稀碱液(1摩尔/升NaOH溶液,即4克氢氧化钠溶于100毫升水)、稀酸液(1摩尔/升溶液,即84毫升浓加水916毫升)等。
灵芝母种制作技术
二、培养基配方
1、马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。
2、马铃薯100g、麸皮100克、蔗糖20g、KH2PO41g,MgSO40.5g、琼脂20g、水1000ml。
3、马铃薯200g、蔗糖20g、KH2PO42g,MgSO40.5g、维生素B120毫克、琼脂20g、水1000ml。
人工栽培的灵芝颜色、形状、大小均匀规则,菌盖呈肾形、半圆形或近圆形。封面为黄棕色至红棕色,封面边缘为浅黄棕色,有同心带和凹槽,有横向皱纹,表面有光泽。但灵芝颜色、形状、大小不均匀,表面无明显光泽。(2)取灵芝粉末2g,加入30ml乙醇,加热回流30分钟,过滤,滤液蒸干,加入2ml甲醇溶解残渣作为供试品溶液。
灵芝母种制作技术
三、培养基配制
1、马铃薯等块茎、植物根去皮后切块洗净,加水1000毫升,文火煮沸30分钟后过滤取汁,其他各类成分称量要精准,配制流程中葡萄糖要zui后加入,灵芝通常要求PH5.5-6,用稀碱1摩尔/升Na〇H、稀酸1摩尔/升HC1来调整酸碱度至适度为止。将琼脂(若为条形需剪短)放入所配液体内,文火煮沸,煮时持续搅拌至溶解。
2、培养基煮好后趁热分装试管,装量为试管长度的四方之一左右,而后塞上棉塞。倾倒时要预防培养基沾污管口,一旦沾上应用纱布擦净。试管要事先洗净,严防油渍。棉塞用未脱脂普通棉花,大小、松紧适中,要求与管壁紧贴。
灵芝母种制作技术
四、灭菌与培养
棉塞端包扎塑料薄膜,放入灭菌锅,经高压灭菌后,去除包扎的薄膜,直立于容器或框架内,使管内水蒸气向外界散发,当温度下降至50℃左右时(取试管1支贴放脸上,很烫但能放得住,大概在50℃左右),即可整捆斜放在斜面板上,斜面长度不能超过管长的二分之一,散热后即凝固成斜面培养基。
培养室温度保持在22~30℃,空气相对湿度控在50~60%,每天通风0.5h,实时检查菌袋有零污染,每周再用5%石灰水轻喷1次,预防杂菌,约50天左右菌丝即可长满菌袋。
二、选地与整地选择向阳且长势较好的林地,挖畦宽80~100cm,深25~30cm,长度视场地而定,周围挖好排水沟,畦底与周围拍实,将挖出的表土集中堆放备用。
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